1. 技�(shù)文章 當前位置�首頁 > 技�(shù)文章 > 詳細�(nèi)�

          凱氏定氮法的�(yōu)�--不同滴定技�(shù)對凱氏定氮法的影�

          �(fā)布:2020-06-22 點擊�2369

          摘要

          影響凱氏定氮儀的性能的幾個因�,即凱氏定氮儀自動蒸餾并滴定樣品以確定蛋白�(zhì)的性能�OPSIS凱氏定氮儀旨在通過顏色滴定,獨特的滴定算法(預(yù)測性滴定)和多種設(shè)計選擇來實現(xiàn)此分析的最高性能,殘留效�(yīng)和氣泡的�(chǎn)�影響最小化�

          本文檔將描述這些選項以及它�?nèi)绾斡绊懛治龅淖罱K�(jié)果。注�,凱氏定氮法在本文件中未作解釋。有�(guān)消化�的更多信�,請參見《針�OPSIS凱氏定氮儀�(yīng)用指南�

           

          1-凱氏定氮�

          凱氏定氮法是測定不同樣品中蛋白質(zhì)的參考標準,通常稱為TKN分析(Total Kjeldahl Nitrogen)。凱氏定氮法�(guī)�消化,蒸餾和滴定樣品三步驟�

          最�,一個世紀以前,滴定是用滴定管手工完成�。這很耗時,出錯的風險很高,而且需要良好的分析技�。因�,在20世紀80年代�(fā)展了一些儀器來簡化和自動化滴定。凱氏定氮分析儀�(xiàn)在可以自動進行蒸餾和滴定�

           

          2-凱氏定氮儀功能

          凱氏定氮�描述了將水和堿分配到樣品管中,然后開始蒸�。通常用蒸汽發(fā)生器�(chǎn)生的蒸汽進行蒸餾。釋放出的氨氣收集在接收器溶液(通常�1%的硼酸)中,然后進行滴定。根�(jù)終點,儀器可以計算出�(jié)�?;瘜W過程可以通過以下化學反應(yīng)來描述:

          加入氫氧化鈉使樣品管中的溶液呈堿性,然后將硫酸銨�(zhuǎn)化為氨氣�

          NH42SO4 + 2NaOH-> 2NH3 + 2H2O + Na2SO4

           

          形成的氨氣從溶液中釋放出�,從消化管中移出,進入含有過量硼酸的接收容�(接收溶液)。接收瓶中溶液的�pH值將氨氣�(zhuǎn)化為銨離�,同時將硼酸�(zhuǎn)化為硼酸離子:

          NH3 + H3BO3硼酸- > NH4 + + H2BO 3 -(硼酸離子)

           

           

          凱氏定氮和滴定法�

          用蒸汽發(fā)生器�(chǎn)生的蒸汽蒸餾樣品,冷卻氨氣并收集在接收容器中�

           

          通過滴定由標準硫酸或鹽酸制成的硼酸銨,并使用合適的指示劑確定反應(yīng)的終�,來估算氮含�

          H2BO3 - + Н+ -> H3BO3

          對于�(zhí)行凱氏定氮分析的所有儀�,此分步過程均相同結(jié)果的精度將取決于分析化學家在處理和移動樣品時,稱量程�,滴定劑的制�,分析變化以及最終儀器引入的變化�

           

          3-滴定技�(shù)

          能夠自動滴定的儀器通常使用pH電極直接測量pH�,或使用顏色傳感器來檢測指示溶液的變化� 兩種方法都有一定的�(yōu)點和缺點�

          pH電極滴定

          只要正確校準�pH電極就可以準確檢測溶液中�pH�。該技�(shù)基于電流差異,因此需要定期校�。如果沒有根�(jù)已知解決方案進行重復(fù)校準,就不可能知道測量結(jié)果是正確��

          pH電極也可能很�,無法識�pH值的變化。因此,更適合在開始用電極測�pH值之前完成凱氏蒸�,即分開蒸餾和滴��pH電極的使用壽命有�,通常為幾��

           

          顏色滴定�

          顏色滴定還可以準確檢測溶液中的特�pH��

          顏色滴定基于指示劑溶液中的顏色變�,因此取決于指示劑的選擇。由于顏色變化與NH3滴定的理�pH值匹�,因此經(jīng)常使用溴甲酚綠和甲基�。顏色滴定不需要任何校�,因為指示劑將始終在相同�pH值下改變顏色�

          連續(xù)滴定與顏色法滴定效果很好�

           

          總結(jié)�

          pH電極�顏色滴定都得到相似的可接受的�(jié)��

          OPSIS凱氏定氮儀采用顏色滴定��

           

          4-蒸餾滴定速度

          分開蒸餾和滴�

          許多實驗室仍然使用兩個單獨的儀�,即蒸餾裝置和滴定儀進行凱氏定氮分析。這意味著處理錯誤和結(jié)果差異風�較大。它也相對較慢,因為在滴定開始之前需要完成蒸��

          蒸餾和滴定的凱氏分析儀將消除操作錯�,但仍然是一種緩慢的儀器�

           

          連續(xù)滴定

          連續(xù)滴定具有明顯的固定�,如果設(shè)計正�,將獲得與分離蒸餾和滴定時相似的�(jié)果�

          主要挑戰(zhàn)在于,當餾出物到達時如何快速響�(yīng),而當最終的氨氣較少時仍要避免過度滴�� 一種常用的方法是測量是否已達到終點,否�,請?zhí)砑痈嗟牡味▌┲敝量梢詸z測到變化� 但是,當今的�(shù)字傳感器傾向開發(fā)更精確的滴定算法�

           

           

           

          典型的氮�/氨蒸�� 在前半分鐘沒有氨�,氨迅速增�,隨后緩慢減��

           

           

           

           

           

           

           

          總結(jié)

          連續(xù)滴定速度�,可達到與分離蒸餾滴定相同的效果�

          OPSIS凱氏定氮儀使用先進的顏色傳感�,配備了新的,專門開發(fā)的算法來�(yōu)化連續(xù)滴定�OPSIS液相線預(yù)測滴定算法允許凱氏定氮儀在任何時候準確地將實際顏色與終點進行比較。因此滴定劑的加入是非常準確�,而顯著快于蒸餾和滴定分離�

           

          5-滴定儀分辨�

          操作裝置

          除了�滴定劑摩�濃度的良好控制之�,具有高分辨率的定量給料裝置也很重要。滴定管通常用作凱氏定氮儀的定量裝置。每個加料步驟的分辨率都會影響最終結(jié)果的精度�

          OPSIS凱氏定氮儀使用1.95 ul/的小劑量步驟,可實現(xiàn)高精��

           

          儀器引入的錯誤

          還有其他可能影響滴定和結(jié)果的錯誤�

          氣泡

          凱氏定氮儀的一個常見問題是管內(nèi)�(chǎn)生的氣泡。當一段時間不移動液體�,通常是整夜不使用儀器時,會出現(xiàn)氣泡� 如果滴定管中注入了氣�,將導致錯誤的結(jié)果�OPSIS凱氏定氮儀旨在通過�(yōu)化滴定罐和滴定管等組件的位置來最大程度地減少氣泡的產(chǎn)�。聚四氟乙烯�Teflon)管也用于進一步減小投加氣泡的風險�

           

          殘留效應(yīng)

          殘留效應(yīng)可能是一個問題,即先前的分析會影響后�(xù)的結(jié)�。要避免這種情況,最重要的是要有一個設(shè)計合理的噴頭,該噴頭可確保只有氣體且堿液中沒有樣品被傳送到冷凝器和接收�。在分析時�,必須用儀器徹底清洗噴��

          OPSIS凱氏定氮儀配有玻璃飛濺�,可將殘留效�(yīng)降至最低�

           

           

           

          使用(NH4)2Fe(SO4)220種不同的凱氏定氮儀上進行回收率測試的摘要,平均值和最大�/最小值(n = 10)。這些儀器的相對標準偏差平均�0.36

           

           

           

           

           

           

           

          6-�(jié)�

          �(yīng)該分析參考樣品以驗證凱氏定氮儀的性能。最常見的是分析具有已知氮含量的物質(zhì),例如硫酸亞鐵銨- (NH4)2Fe(SO4)2�

          該分析應(yīng)能完全恢�(fù),沒有殘留影響,并且標準偏差�rsd)低�OPSIS凱氏定氮儀的相對標準偏差(rsd)小�0.75%�

          軟件中提供了一個測試性能恢復(fù)的特定程�,稱為性能跟蹤,該程序可用于所有儀器的生產(chǎn)控制中。良好的�(shè)計導致儀器的檢測點非常低,樣品的定量限也很低。這是由于空白的變化很小,因此在分析低含量的氮時噪聲有��OPSIS凱氏定氮儀的最低定量限�LOQ)可以低�0.013 mgN

           

          OPSIS 凱氏定氮儀

          使用技�(shù)�顏色滴定

          滴定法:可預(yù)測的滴定

          �(shè)�PTFE管,防噴濺保護頭�1.95 ul / 的高精度滴定�

          檢測范圍�0.1-225 mgN

          精度�<0.75%(標準偏差�

          最低檢測限�LOD):0.004 mgN

          最低定量限�LOQ):0.013 mgN

           

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